Dicroísmo linear detectado por fluorescência: uma nova perspectiva com o J-1500 da Jasco

As proteínas de membrana desempenham papéis cruciais em processos biológicos, como sinalização celular, transporte de substâncias e interação com o ambiente extracelular. Estima-se que até 30% das proteínas codificadas por genomas sejam proteínas de membrana. No entanto, sua análise estrutural é desafiadora devido à complexidade e dinamismo das membranas biológicas, que contêm múltiplos analitos e apresentam natureza dinâmica.

Técnicas convencionais de espectroscopia, como o dicroísmo linear (LD) em fluxo, têm sido utilizadas para estudar a orientação de estruturas secundárias de proteínas em relação à normal da membrana. Porém, a dispersão de luz pelos lipossomos frequentemente supera os sinais de LD, dificultando a obtenção de dados precisos, especialmente em comprimentos de onda mais baixos.

Para superar essas limitações, o estudo demonstrou como o espectropolarímetro J-1500, equipado com uma célula de fluxo de Couette de microvolume e filtros de corte apropriados, pode ser utilizado para medir espectros de excitação de FDLD de fluoróforos incorporados em membranas lipossomais. Essa abordagem permite eliminar a interferência da dispersão de luz, resultando em espectros que refletem com maior precisão a orientação dos analitos na membrana.

O espectro de FDLD obtido apresenta sinal oposto ao do LD convencional, com magnitudes relativas modificadas pelos rendimentos quânticos das transições. Essa técnica possibilita a identificação da orientação de analitos em membranas, sendo aplicada com sucesso a peptídeos de membrana, como a gramicidina, e a analitos aromáticos, como antraceno e pireno (Figura 1).

Figura 1: Dicroísmo linear detectado por fluorescência (FDLD) em fluxo de Couette (tensão de alta voltagem [HT] = 600 V), dicroísmo linear (LD) e absorbância do pireno (140 mM) em lipossomos de fosfatidilcolina (PC) na proporção 1:100.

O J-1500 da Jasco destaca-se por sua flexibilidade e desempenho óptico incomparável, permitindo a realização de experimentos em diversas técnicas espectroscópicas, incluindo CD, LD, FDLD e absorbância. Com uma ampla gama de acessórios, como sistemas de controle de temperatura e células de fluxo, o J-1500 atende às demandas de pesquisas complexas em bioquímica, química orgânica e estudos estruturais de macromoléculas.

Em resumo, a aplicação da técnica de FDLD utilizando o espectropolarímetro J-1500 da Jasco representa um avanço significativo na análise de proteínas de membrana, oferecendo maior precisão e confiabilidade na obtenção de dados estruturais, mesmo em sistemas complexos e dinâmicos como as membranas lipossomais.

Para aprofundar-se no estudo publicado na revista Chirality, que explora a aplicação do dicroísmo linear detectado por fluorescência (FDLD) em lipossomos utilizando o espectropolarímetro J-1500, clique no botão:

Descubra todos os modelos de espectropolarímetros de dicroísmo circular da série J-1000 da Jasco, incluindo o J-1500, e conheça os acessórios disponíveis para cada equipamento. Acesse o catálogo completo através do link: