Princípios de espectroscopia de dicroísmo circular (4)
6 de outubro de 2020
Princípios de espectroscopia de dicroísmo circular (6)
6 de outubro de 2020

Princípios de espectroscopia de dicroísmo circular (5)

Variedade de aplicações

Microamostragem

Para medições em CD em uma célula cujo caminho ótico é de 1mm, necessita-se de um volume de amostra de aproximadamente 400 µL. No entanto, para amostras de valor agregado muito alto, um disco de microamostragem pode ser empregado, de modo a analisar quantidades ainda menores. O espectro de CD pode ser medido após o posicionamento de uma gotícula de amostra na área recoberta por material hidrofóbico, no centro do disco (figura 13). O volume que pode ser medido vai desde 2 µL até 10 µL.

Na figura 14 é possível observar a análise de uma gota de 10 µL de uma solução de DNA de timo bovino e uma amostra da mesma solução, em uma célula de 400 µL. Apesar da diferença de volume, observa-se um espectro praticamente idêntico.

Estudos cinéticos utilizando o método de fluxo interrompido

O processo de reação de substâncias oticamente ativas pode ser rastreado utilizando a técnica de fluxo interrompido. Este método pode ser empregado para avaliação de taxas de reação, intermediários de tempo de vida curto e inibidores e aceleradores de reação. Em particular, este tipo de técnica tem sido empregado para análises de enovelamento de proteínas. Empregando esta técnica para avaliar diferenças de sinal de CD ao longo de milissegundos, é possível observar a desnaturação de uma proteína e mudanças estruturais de uma molécula quiral. A figura 15 apresenta mudanças de sinal de dicroísmo circular durante a hidrólise da D-glucuronolactona em solução aquosa de hidróxido de potássio.

 

 

 

Screening multiamostra (HTCD)

A efetividade de CD para o monitoramento de mudanças estruturais de proteínas já foi avaliada. Recentemente, adicionalmente ao CD, medições simultâneas de absorção UV e fluorescência e medições multiparâmetro envolvendo mudanças de temperatura e pH, têm sido comuns. Ao mesmo tempo, a necessidade de um equipamento que possa processar amostras com alta produtividade e de maneira automatizada vem crescendo rapidamente.

De maneira a produzir tratamentos médicos customizados como medicamentos à base de ácidos nucleicos ou anticorpos, faz-se extremamente necessário o acompanhamento de estudos de moléculas quirais com equipamentos de alta eficiência.

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