Quantificação de proteínas no UV-730 Bio – Método Lowry

O método de quantificação de proteínas desenvolvido por Oliver H. Lowry em 1951 permanece como uma das abordagens mais sensíveis e amplamente utilizadas em bioquímica. Sua popularidade se deve à capacidade de detectar pequenas concentrações de proteínas com alta precisão, mesmo em amostras complexas ou parcialmente purificadas.

A base do método Lowry reside em duas reações colorimétricas sequenciais. Inicialmente, os íons cúpricos (Cu²⁺) reagem com as ligações peptídicas das proteínas sob condições alcalinas, formando íons cúpricos reduzidos (Cu⁺). Em seguida, esses íons Cu⁺ reduzem o reagente de Folin-Ciocalteu, resultando na formação de um complexo azul (Figura 1) cuja intensidade é proporcional à concentração de proteínas presentes na amostra. A absorbância desse complexo é medida em 750 nm, permitindo a quantificação precisa das proteínas.

Figura 1: Mudança de cor após adição do reagente Folin-Ciocalteu

Apesar de sua sensibilidade e precisão, o método Lowry requer cuidados específicos, como a preparação adequada dos reagentes e o controle rigoroso das condições de reação, incluindo o tempo de incubação e o pH da solução. Além disso, a presença de substâncias redutoras ou agentes quelantes pode interferir nos resultados, exigindo atenção na preparação das amostras.

Para facilitar a aplicação do método Lowry e de outras técnicas de quantificação proteica, como Biuret, BCA, Bradford e WST, o espectrofotômetro UV-Vis V-730 Bio da Jasco oferece uma plataforma integrada e versátil. Projetado especificamente para análises bioquímicas, o V-730 Bio permite a seleção do método mais apropriado com base nas características da amostra e na faixa de concentração desejada. Além disso, o equipamento inclui programas de análise quantitativa que auxiliam na construção de curvas de calibração e na interpretação dos resultados, tornando o processo mais eficiente e confiável.

No estudo conduzido pela Jasco utilizando o V-730 Bio, foi analisada a cinética da reação cromogênica do método Lowry com a albumina sérica humana (HSA). Observou-se que a absorbância a 750 nm aumentou progressivamente após a adição dos reagentes, estabilizando-se aproximadamente após 60 minutos (Figura 2). Esse comportamento indica que a reação atinge um platô, momento ideal para a medição precisa da concentração proteica.

Figura 2: Perfil temporal da reação cromogênica

Além disso, os espectros das soluções aquosas de HSA, medidos após esse período de incubação, apresentaram um pico de absorbância bem definido em 750 nm (Figura 3). Esses resultados confirmam a eficácia do método Lowry na quantificação de proteínas, especialmente quando se respeita o tempo de reação necessário para a estabilização da cor. O uso do V-730 Bio facilita esse processo, oferecendo medições precisas e reprodutíveis, essenciais para aplicações bioquímicas e clínicas.

Figura 3: Espectro da solução aquosa de HSA obtidos pelo método de Lowry,

Com o V-730 Bio, pesquisadores e profissionais de laboratório podem realizar quantificações proteicas com maior precisão e praticidade, aproveitando os benefícios do método Lowry e de outras abordagens complementares. Essa integração de tecnologia e metodologia contribui para avanços significativos em pesquisas bioquímicas e aplicações clínicas.

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