Princípios de microespectroscopia (1)

A microespectroscopia é um termo empregado para técnicas oriundas da combinação entre microscopia ótica e espectroscopia molecular. Ao contrário de amostras homogêneas podem ser estudadas através de técnicas de espectroscopia de absorção como a espectroscopia UV-Vis, para isto, é necessário um sistema de maior complexidade para a avaliação assertiva de sistemas heterogêneos como tecidos biológicos ou materiais, possibilitando a visualização da amostra através de um microscópio.

A técnica permite um avanço imenso no segmento de análises de amostras heterogêneas, cujas imagens podem ser capturadas através de um microscópio ótico e identificadas com base no contraste de absorção, espalhamento ou difração de luz.

Os equipamentos são ferramentas importantes para a definição da distribuição molecular ao longo de uma amostra. Um exemplo de aplicação foi o estudo do cientista sueco T. Caspersson na década de 1930 cujo trabalho incluiu a definição de DNA como uma macromolécula e o “bandamento G”.

Configuração de um microespectrômetro

A figura 1 apresenta um exemplo de configuração de um microespectrômetro que opera dentro do espectro de luz visível empregando observação por transmissão. Neste sistema a luz é introduzida por baixo da amostra e é utilizada tanto para a criação de uma imagem quanto para a obtenção de uma medida espectroscópica. As duas lentes objetivas têm a função de iluminação e observação da amostra.

A luz passa pela amostra no ponto focal da objetiva inferior e da objetiva do microscópio e em seguida é direcionada para a câmera CCD para o desenvolvimento da imagem. Um espelho retrátil é então posicionado de modo a direcionar luz à um espectrômetro. Os dois resultados podem ser sobrepostos através do emprego de um software.

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